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蛋白定量有哪些方法？

蛋白定量的方法有很多种，应用较多的主要有两种：BCA蛋白定量检测法和Bradford蛋白定量检测法，市售的蛋白定量试剂盒也多基于上述两种检测方法而开发的。两种方法均需配制蛋白标准品，蛋白与定量试剂经过一定时间的反应（BCA法反应为37℃、20-30min，Bradford法反应一般为37℃，5min），酶标仪读取样品的OD值，绘制的蛋白标准曲线，依据标准曲线计算WB蛋白的浓度。两种检测方法笔者均有使用经验，相比BCA法，Bradford法不仅节省反应时间，也无需配置反应试剂，...

做实验不会制备金年会爬片怎么行?

我们在做免疫荧光（IF），激光共聚焦(Confocal)，凋亡检测（TUNEL）时，免不了要制备金年会爬片，爬片质量*决定了最后拍照的质量以及实验数据的精准性。今天，就教大家如何制备好的金年会爬片。一.实验材料及试剂盖玻片、培养板、酒精灯、镊子等；75%乙醇、DMEM*培养基（RPMI-1640*培养基）、胰酶等。二、实验内容爬片准备：1、24*24盖玻片，刚好用于6孔板。也可用更大的盖玻片，放在大的培养皿中爬片。2.盖玻片泡酸过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再置于无水酒清中浸...

金年会销售Agrisera品牌产品——植物抗体ling航者

Agrisera公司成立于1980年，位于瑞典，长期以来，公司致力于植物/环境科学研究中所需蛋白抗体研发与销售，以专注于研发高品质稀有单金年会及多金年会抗体而在业界有较高知ming度。其抗体主要涉及植物蛋白，Agrisera公司提供1000种用于植物和藻类金年会生物学研究的一抗，2000多种二抗。Agrisera公司提供的抗体分两大类：植物及藻类的抗体，以及细菌、真菌、昆虫、鱼等动物类抗体。针对植物蛋白质的保守氨基酸序列，Agirsera还du家开发了数十种通用抗体（globala...

快速抗体制备服务

抗体的产生，是围绕B淋巴金年会的激活与分化为浆金年会进行的。在shou次免疫过程中，抗原首先经多种兔疫相关淋巴或巨噬金年会吞噬充分暴露抗原,并将抗原呈递给静止B淋巴金年会，以使其活化，活化后的B淋巴金年会转化为浆金年会，也就是抗体的产生者。由于抗原的表面存在多种抗原识别决定簇，因此在经过免疫相关金年会加工后，呈递给B淋巴金年会的抗原决定簇也是多种多样的，理论上，一个B淋巴金年会只接受-种抗原决定簇，产生-种对应与之结合的抗体，多个B淋巴金年会就会产生多种识别抗原不同抗原决定簇(也就是表位)的抗体...

质粒DNA提取实验

在我们的金年会实验中经常会用到质粒DNA，那么具体是怎么来的呢？今天讲的是DNA的提取步骤。前提：细菌繁殖步骤（挑单金年会，置于LB培养基中，置于37℃恒温摇床摇过夜，180-200rpm）。一般市面上有很多试剂盒可供大家使用，大体步骤都差不多的啦~~我按照我所使用的试剂盒（AxyPrep中抽试剂盒）的步骤分享如下：收集1.50ml离心管收集过夜摇菌的LB培养液（此时可以做一下判断，如果液体未变浑浊，说明细菌并未繁殖成功，这样肯定难以提出DNA；如果液体浑浊，便说明细菌繁殖成功啦...

常见问题之蛋白在真核金年会的表达量低？

实际上真核生物的蛋白也可以用真核金年会蛋白表达系统来实现，而且效果往往更好。用原核生物来表达主要还是因为操作简单，快速。如果希望表达和纯化的蛋白性质稳定，经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象，那么使用原核表达系统就很合适了。有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候，一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列值后，直接表达成熟肽，表达水平明显提高。所以说构建的真核表达载体高表达mRNA却检测不到目的蛋白是*有可能的。

常见问题之影响蛋白表达因素有哪些？

1.蛋白本身的特性：蛋白分子量大小、蛋白来源/物种、是否为毒性蛋白，蛋白翻译后修饰程度、蛋白自身结构的复杂程度2.宿主的选择：宿主本身的特性、蛋白表达需求等都影响着蛋白表达3.蛋白需求量：蛋白应用范围对应的需求量不同，所以要根据需求量确定表达系统4.质粒载体的选择：载体是携带外源基因的工具，要根据系统选择合适的载体才能使蛋白更好的表达5.融合标签的选择：蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用：一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易；另一方面是为了促进某些不溶性蛋...

常见问题之HIS标签蛋白没有被洗脱下来

蛋白挂柱后洗脱不下来主要是因为蛋白和柱子结合能力太强或者洗脱条件太温和，我们可以从以下几方面考虑解决问题。1、洗脱条件太温和：重新摸索洗脱条件，增加缓冲液中咪唑浓度或者适当降低缓冲液pH以确定最佳的洗脱条件或者更、换缓冲液的成分（换成tris-HCl缓冲液）。2、蛋白在柱子中沉淀：适当降低上样量或蛋白浓度，用咪唑线性洗脱。使用添加剂或者改变NaCl的浓度，或者在变性的条件下洗脱（加4-8M的尿素或者4-6M的盐酸胍）。3、非特异性的疏水或者其他作用：在洗脱液中加非离子的添加剂...